Protocols

凝胶内染色（In-gel staining）

1.准备100毫升琼脂糖凝胶溶液（浓度为0.8-3.0％）并加热，直到溶液完全澄清且看不到小漂浮颗粒为止。

2.在凝胶溶液中加入4-6 µl MIDORI Green Advance DNA Stain，轻轻混匀。将凝胶冷却至50-60ºC，然后将凝胶浇铸到凝胶托盘中。当凝胶为固体时，加载样品并进行电泳。

3.使用UV或LED照明器检测和拍照。

后染（Poststaining）

1.MIDORI Green Advance DNA Stain后染液可以使用2-3次。

2.将要重复使用的染色溶液应优选在室温下避光保存。

3.对于<0.5 cm厚的琼脂糖凝胶，每100 ml缓冲液应使用10-25 µl的染料。

4.最佳的染色时间（5 – 60分钟）和染料的用量可能取决于凝胶的厚度。

注意：不建议用含有SDS的上样缓冲液（Loading Buffers），因为染料和SDS相互作用会导致条带出现！

常见问题（FAQ）

Q1. 为什么Midori Green比溴化乙锭（EB）或SYBR Green更安全？

有以下三个原因：

1）Midori Green与DNA分子的结合较少，因此在合成过程中发生的突变较少。

2）Midori Green不会穿透皮肤或质膜，因此对活细胞的吸收非常少。

3）Midori Green的半衰期很短，因此在环境中会很快分解。

在Midori Green上进行的广泛测试证明了这一点。详情可以下载安全报告。

五种安全测试

I. Ames Test（污染物致突变性检测）

II. The Acute Oral Toxicity Test（急性口腔毒性试验）

III. The Mouse Bone Marrow Micronucleus Test（小鼠骨髓细胞微核试验）

IV. Chromosome Aberration Test（染色体畸变测试）

V. Latex And Nitrile Gloves Penetration Test （乳胶和丁腈手套的渗透测试）

Q2. Midori Green使用后如何处置？

Midori Green不会产生任何有毒废物。 因此，可以根据实验室规定按无毒废物进行处理。

Q3. 可以在聚丙烯酰胺/尿素凝胶中使用MIDORI Green Advance吗？

 可以的。

Q4. 可以在尿素/甲酰胺凝胶中使用MIDORI Green 吗？

 不可以的，因为甲酰胺的原因。尿素凝胶是可以的。

Q5. MIDORI Green Advance是否含有DMSO？

不含（DMSO Free）。

Q6. 我可以使用紫外线透射灯还是需要购买LED照明器？

具体看。 Midori Green Advance和Midori Green Direct不需要LED照明器，只要您的紫外线工作台的发射波长为270 nm或更高，就可以令人满意。 为了获得最佳结果，我们建议您使用蓝色LED或蓝色/绿色LED照明器。

Midori Green Xtra与紫外线照明不兼容，但是蓝色LED和蓝色/绿色LED光源都可以很好地工作。

Q7. 当使用Midori Green Direct时，我的凝胶上的条带看起来是波浪形的。什么原因？

Midori Green Direct是一个大分子，因此它不会穿透皮肤或穿过质膜。 由于其大小，该分子可能会卡在凝胶基质中。 “波浪带”问题主要是由于样品中添加了过多的Midori Green Direct所致，因此，我们建议使用1:10的比率--每个样本不超过0.5μL，即使小于1:10！ 帮助改善这种效果。

Q8. Midori Green可以与TAE和TBE一起使用吗？

是的。TAE和TBE缓冲液均与琼脂糖凝胶中的Midori Green相容。 Midori Green在这些缓冲溶液中具有良好的稳定性，只要将凝胶保存在防光的储存容器中，它将继续提供很强的信号。

Q9. 是否可以像使用溴化乙锭（EB）那样，在琼脂糖凝胶中用Midori Green对DNA染色？

是的。 Midori Green可以像EB一样用于凝胶中。 但是，后染的灵敏度应比预制凝胶内染色更好，从而消除了染料干扰核酸条带迁移和分离的任何可能性。

Q10. Midori Green可以用于后染吗？

可以的。

Q11. 用于后染色时，应如何稀释Midori Green Advance？

将5-15 µL Midori Green Advance加入100 mL缓冲溶液中。 根据您的实验调整最佳浓度和染色持续时间（通常为5至60分钟）。

Q12. Midori Green是否在凝胶中迁移？

是的，Midori Green带正电，与DNA和RNA条带的运行方向相反。 这可能导致明暗背景过渡。 对于电泳凝胶，我们建议使用最佳电泳时间和琼脂糖百分比。 对于更长的产品/运行时间，我们建议进行后染。

Q13. Midori Green可以稀释吗？

是的。 Midori Green溶液可以在超纯水中稀释。

Q14. 我们可以将Midori Green用于RNA吗？像DNA那样。

是的。 Midori Green的所有三种类型染料（Advance，Direct，Xtra）均会产生非常强烈的RNA，dsDNA和ssDNA染色信号。

Q15. Midori Green可以使用哪些滤光片（波长）？

设计用于绿色染料的滤光片（例如GFP / SYBR绿色滤光片）最敏感。 对于Midori Green Advance和Midori Green Direct，也可以使用EB滤光片或仅使用不含任何滤光片的紫外线。

Q16. 在加热过程中，是否可以向溶解在TAE缓冲液中的琼脂糖中添加Midori Green？

不可以。不建议将Midori Green添加到热琼脂糖溶液中。 我们建议将琼脂糖溶液冷却至约60°C，加入Midori Green，然后小心摇动并充分混合。

Q17. Midori Green是否检测到低DNA浓度？

是的。 Midori Green在低DNA浓度以及小的DNA片段（≥100个碱基）下表现良好。

Q18. Midori Green是否会干扰下游应用？

它可能取决于你后续的实验。 为了避免在下游处理步骤中使用Midori Green，您可以先使用纯化试剂盒纯化DNA。

Q19. Midori Green可以用于脉冲场凝胶电泳吗？

否。不建议使用。可以后染。

Q20. 是否可以将Midori Green用于Southern Blot印迹实验？

是的。 Midori Green是用于Southern Blot实验的DNA染色染料的理想选择。 它不会干扰转移至印迹或与探针杂交。

Q21. Midori Green一旦跑胶，是否会干扰从染色凝胶中回收DNA？

不会。Midori Green通常不会与DNA或RNA共纯化。

Q22. Midori Green应该存放在哪里？

为了获得最佳性能和稳定性，Midori Green应该在避光保存（Midori Green在棕色小管中提供给客户）。

Q23. Midori Green会渗透乳胶手套吗？

不会。Midori Green分子太大，无法穿透乳胶手套。

Q24. 我发现使用Midori Green Advance时，电泳后凝胶底部看起来更暗。为什么是这样？

Midori Green带正电，因此凝胶基质中的游离染料将向凝胶顶部迁移，并形成较暗的正面。仅当将Midori Green Advance或Midori Green Xtra添加到熔融琼脂糖中时，才能看到此效果。为了提供更一致的背景，您可以进行后染色或使用Midori Green Direct（直接添加到样品中）。

Q25. 凝胶中Midori Green Advance的背景荧光太高，很难看到较暗的DNA条带。是否有建议改善这些微弱频段的信噪比？

是的。如果在100 mL琼脂糖凝胶中使用4 µL Midori Green Advance仍能看到较高的背景，则降低至2 µL。这只会降低背景信号；微弱的条带仍会被染料浸透。这对于我们的蓝/绿LED技术尤其有效，该技术可为所有绿色和红色染料提供更亮的信号。

Q25. Midori Green会导致我的DNA条带迁移率发生变化吗？

不会，但有一个例外。 Midori Green Advance和Midori Green Xtra不会改变DNA条带的迁移速率。 另一方面，如果样品中添加的Midori Green Direct过多，则可能会导致条带迁移不同。 结果，尽管我们通常建议对样品使用1:10的稀释度，但每个样品的量绝对不能超过0.5 µL Midori Green Direct。 遵循这一经验法则，条带应该不会出现任何不正常的变化。

Q26. Midori Green Advance可以用于变性甲醛凝胶以分离RNA吗？

是的，可以使用：

我们使用后染色和凝胶染色两种方法，用TAE缓冲液从1％甲醛凝胶中分离了总RNA。 在每种情况下，每100 ml缓冲液使用5微升。 后染色在室温下进行1小时。

每条线的最低RNA浓度应至少为250 ng。 良好的工作RNA浓度在500 ng。

Q27. 是否可以将Midori Green Advance添加到跑胶缓冲液中以减少凝胶的变色？ 如果是，我应该使用多少量？

您可以在跑胶缓液中使用Midori Green Advance。 这种情况，每100 ml缓冲液应使用8 µL。

Q28. 到有效期后可以继续使用Midori Green Advance吗？

是的，您可以使用它。 到期日期只是我们保证的最短时间，但通常会持续更长的时间。

Q29. 如果我将Midori Green Advance在-20°C下存储6天会怎样？ 可以使用吗？

冻结会破坏MGA的功能。 您仍然可以尝试，但我们的经验建议 别再使用。

Q30. 我在琼脂糖凝胶中使用Midori Green Advance，为什么在凝胶电泳35分钟后看不见小条带，您有什么建议？

Midori Green Advance带有正电荷，并且与DNA的电泳移动方向相反，因此凝胶从底部脱色。 要查看小条带，您可以将运行时间减少到25分钟。 如果您想让凝胶运行更长的时间，那么建议后染。 您可以使用箱凝胶内染色，然后短时间的后染，或者仅对凝胶进行后染而无需先前的凝胶内染色。 在这两种情况下，整个凝胶都会被染色，并且观察到非常低的分子量带。 您也可以使用Midori Green Direct代替Midori Green Advance。 这种染料会添加到DNA中，因此无论电泳多长时间，每个条带都会被染色。 另一个优点是不存在背景。 特别是，如果您使用蓝色或蓝色/绿色LED灯代替紫外线，则会看到令人惊奇的信号。

1.操作手册（Manual）：MG12_Midori-Green-Easy_Manual

2.宣传彩页（Flyer）：MIDORI Green Safe DNA Stain